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乙醇檢測儀 乙醇測定儀-葉綠素含量測定方法優(yōu)劣和快速測定的步驟
發(fā)布時間:2021-09-05 17:00瀏覽次數(shù):

葉綠素是光合作用最重要的產(chǎn)物,同時葉綠素含量也是植物重要的生理指標(biāo)之一。因此乙醇測定儀,研究葉綠素的提取方法意義重大。葉綠素含量測定方法一般有分光光度法、活體葉綠素儀法和光聲光譜法,以分光光度法應(yīng)用最廣泛。因所用提取葉綠素的溶劑不同又有多種測定方法氯氣檢測儀,早期葉綠素測定廣泛采用葉綠素檢測儀,但該方法由于先研磨后除渣,工作量大、步驟多乙醇測定儀,且容易受光氧化而引起偏差,不適宜田間大量樣品的提取和測定。通過比較幾種不同混合提取液的提取,提出測定棉花葉片葉綠素含量的最佳方法為丙酮浸提法。分別對不同配比的丙酮、乙醇和水的混合液的浸提效果進(jìn)行了研究,證明利用混合液進(jìn)行葉綠素浸提的可行性。研究表明,丙酮與乙醇混合液提取葉綠素存在協(xié)同效應(yīng),且二者在等摩爾混合時提取效果最好,而研究認(rèn)為,丙酮乙醇(2:1)混合液浸提葉綠素效果較好。該試驗在前人研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討葉綠素含量測定各方法的優(yōu)劣及快速測定的步驟乙醇檢測儀,為小白菜田間大樣本葉綠素含量測定提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

將新鮮小白菜葉片洗凈、晾干、去大葉脈后剪碎混勻。試驗采用752S紫外可見分光光度計,丙酮、95%乙醇等試劑均為分析純,試驗用水為二次水。

1.2 試驗方法

1.2.1 不同浸提液提取效果試驗

稱取0.5 g試材于試管中,剪取葉片成2 mm碎條,在室溫下立即用丙酮研磨法和直接浸提法(4種提取液:95%乙醇,丙酮、乙醇(1:1),95%乙醇、丙酮、水(4.5:4.5:1),丙酮、95%乙醇(2:1))提取葉綠素,3次重復(fù)。浸提在黑暗中進(jìn)行,每支試管加入浸提液10 mL,并不時搖動,等葉片變白,約14 h后定容25 mL,測定吸光值。室溫下以相應(yīng)試劑為參比,分別在645 nm和663 nm處測定吸光度,由公式計算葉綠素a與葉綠素b的含量。葉綠素a(chla)含量(mg/g)=(12.7×A663-2.697×A645)7×V/();葉綠素b(chb)含量(mg/g)=(22.77×A645-4.687×A663)7×V/();葉綠素總含量(mg/g)=chla含量+chlb含量。式中A663、A645分別為相應(yīng)波長下的吸光度值,V為提取液體積,W為所取葉片質(zhì)量。

1.2.2 不同浸提液提取效果及穩(wěn)定性試驗

光穩(wěn)定性試驗:將樣品于測定后見光放置,分別于放置1、3、5 h后再次測定提取液中葉綠素的變化,比較葉綠素在不同提取液中的穩(wěn)定性。再使用葉面積測定儀測量小白菜葉的面積,熱穩(wěn)定性試驗:用浸提法進(jìn)行葉綠素提取試驗,取提取液10 mL于有塞試管中,水浴中加熱,分別在30、50、70℃條件下保溫10 min,冷卻到室溫后,測定葉綠素含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同提取方法的提取效果及光穩(wěn)定性比較

由表1~5可知,5種不同提取方法以混合液(乙醇:丙酮=1:1)浸提法所得總?cè)~綠素含量最高(為0.438);乙醇浸提法最低(僅0.305);其它3種提取方法相差不大。降解值以丙酮研磨法最快(為0.263);混合液(乙醇B丙酮B水=4.5:4.5:1)浸提法其次(為0.208);混合液(乙醇:丙酮=2:1)和混合液(乙醇:丙酮=1:1)浸提法較慢(分別為0.185和0.165)。說明乙醇檢測儀,丙酮研磨法可能因研磨過程破壞了葉綠體,所提取的葉綠素在光下極不穩(wěn)定。而混合液(乙醇:丙酮=2:1)和混合液(乙醇:丙酮=1:1)浸提法可獲得較高的葉綠素含量,同時在光下也有較好的穩(wěn)定性。

隨見光時間的延長,各種提取方法均以葉綠素a降解值遠(yuǎn)遠(yuǎn)快于葉綠素b。不同提取方法葉綠素a降解值在0.133~0.288之間變化,而葉綠素b降解值0.020~0.053之間變化。另外,每種提取方法的chla/chlb值均隨見光時間的延長表現(xiàn)出逐漸減小的趨勢,也可反映出

表1 丙酮碾磨法所得葉綠素含量及光穩(wěn)定性比較

如何檢測乙醇濃度_乙醇揮發(fā)性雜質(zhì)檢測_乙醇檢測儀

表2 乙醇浸提法所得葉綠素含量及光穩(wěn)定性比較

表3 乙醇:丙酮=1:1浸提法所得葉綠素含量及光穩(wěn)定性比較

表4 乙醇:丙酮=2:1浸提法所得葉綠素含量及光穩(wěn)定性比較

表5 乙醇:丙酮:水=4.5:4.5:1浸提法所得葉綠素含量及光穩(wěn)定性比較

葉綠素a降解速度快于葉綠素b。說明在可見光下,葉綠素a較葉綠素b更易降解。

2.2 不同浸提液提取方法的熱穩(wěn)定性比較

由表6可知乙醇檢測儀,各浸提方法所得chla、chlb和Chla+b含量均隨溫度升高而降低,在70℃下,乙醇浸提法幾乎全變褐色,而其它處理仍可見到綠色,其中,以混合液(乙醇:丙酮=1:1)浸提法Chla+b含量為最高。說明,單一乙醇浸提所得葉綠素含量較低且不穩(wěn)定,而加入丙酮后葉綠素含量提高且較穩(wěn)定。各處理chla/chlb值也隨溫度升高而減小,說明在高溫下葉綠素a較葉綠素b更易降解,與在光下的變化一致。

表6 不同提取方法的熱穩(wěn)定性比較

3 小結(jié)與討論

混合液浸提法不但所得葉綠素含量高于乙醇浸提法,且對光熱的穩(wěn)定性也優(yōu)于乙醇浸提法。其中以混合液(乙醇:丙酮=1:1)浸提所得葉綠素含量最高。試驗中單一乙醇浸提所得葉綠素含量較低,且不穩(wěn)定,當(dāng)加入丙酮后葉綠素提取更完全,且穩(wěn)定性較好。結(jié)果表明,丙酮與乙醇混合液提取葉綠素存在協(xié)同效應(yīng),且二者在等摩爾混合時提取效果最好,這與研究結(jié)果一致。

試驗中丙酮研磨法也可得到較高的葉綠素含量,這與前人研究結(jié)果不同硫化氫檢測儀,具體原因有待于進(jìn)一步研究。

但因研磨法所提取的葉綠素在光下極不穩(wěn)定,因而這種方法也不可取。綜合分析得出,小白菜葉綠素提取效果最好的是混合液(乙醇:丙酮=1:1)浸提法,其次為混合液(乙醇:丙酮:水=4.5:4.5:1)浸提法和混合液(乙醇:丙酮=2:1)浸提法,丙酮研磨法和乙醇浸提法效果最差。

隨見光時間的延長和溫度的增加,各種提取方法均以葉綠素a降解值遠(yuǎn)遠(yuǎn)快于葉綠素b。說明葉綠素a降解速度快于葉綠素b,這與的研究結(jié)果一致。結(jié)果表明,影響葉綠素提取效率的關(guān)鍵是葉綠素a的提取速度及其穩(wěn)定性保持。

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